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拟南芥培育方法
點擊次數:1726 發布時間:2015-12-25
 一、原理

拟南芥作為高等植物的模式生物被全世界的植物生物學實驗室廣泛研究。然而,照顧好這種小植物可能不是那麼容易。這裡介紹一個馬裡蘭大學帕克學院的HevenSze實驗室的通用指南。Sze實驗室及其他實驗室的成員為建立這個在實驗室培育拟南芥的通用指南做出了許多努力。

 二、步驟

1.  準備種植用土

我們使用Miracle-Gro混合土(2立方英尺一袋)與Miracle-Gro8誇脫.MiracleGro珍珠岩來培養拟南芥,在一個可以放下2袋混合土的大容器中和土,1袋混合土(2立方英尺)混入半袋珍珠岩(4誇脫)。

注意:Sze實驗室在裝土之前經常将土滅菌!(方法如下)

1)将幹土放入滅菌容器中,直至與頂部相差一英寸,将土拍實。

2)用鋁箔紙将容器封住,在每一個容器上放一張滅菌用膠帶,纏好。确保容器外沒有土,放入滅菌鍋。

3)用常規/秒速/快速模式滅菌30~50 min,滅菌模式及時間取決于滅菌的容器數量。

4)當溫度降至室溫,将土放入花盆,輕輕壓實。記住将滅菌土保存好,避免種子或菌類污染。滅過菌的土至少可以使用兩星期,如無需要請不要多次滅菌。

5)将花盆用去離子水浸沒(不要超過土表面)用humidomes覆蓋,使其吸水3-6小時或過夜。吸水後應該還保存約1英寸高的水,如果沒有請添水。

6)此時的土可以用于種植拟南芥。

2.  種子消毒

方法A

1)取适量種子(野生型、突變體或互補株系)置于一個EP管中,加1 ml 消毒溶液。

消毒溶液:

20%Chlorox消毒液

0.05%Tween-20

用新滅過菌的無菌水配制。

2)用振蕩器以zui大速度震蕩20-30秒。

3)放置7-10 min,偶爾震蕩一下。

48 000 rpm 離心5秒。

5)仔細将水倒出。

6)加1 ml 無菌水,震蕩重旋種子。

78 000 rpm 離心5秒,倒去上清。

8)重複步驟6-7,重複四次。

9)将滅菌的種子移到底部鋪有無菌濾紙的小Fisher盤(100×15 mm)中。

10)将種子用鑷子移到瓊脂培養基或土中,鑷子在70%乙醇中浸泡>30 min

方法B

1)将适量種子放入1.5 ml EP管中。加入1 ml 70%乙醇。

2)将水倒出,加入5 ml 70%乙醇,放置5分鐘。

3)用無菌去離子水漂洗四次。

4)加入0.1%TritonX-100(或30%漂白液+0.1%TritonX-100),放置10分鐘。

5)用無菌去離子水徹底漂洗(至少5次)。

6)将滅菌的種子移到底部鋪有無菌濾紙的小Fisher盤(100×15mm)中。

3.  種植

常規注意事項

請注意伱的種子可能在從親本結出的過程中攜帶真菌和細菌,所有的植物種子都需要滅菌,對來自其他實驗室的植物或種子這一步也是必要的。在我們實驗室髒東西基本來自于種子(因為我們使用滅菌土),花非常容易吸引昆蟲,請注意一下花。

種植健康的拟南芥在開始前,托盤必須幹淨,沒有舊種子及真菌。

1)将花盆裝滿土。

2)在托盤中加入無菌水,水位大約在花盆的1/3-1/2高。土壤吸水時間至少3小時。在土表面噴撒無菌水,保證種子可以置于一個潮濕的環境。

3)将種子轉移到花盆中(每個花盆8-10粒種子,種子間均勻隔開)

4)種植後在托盤上覆蓋一個保鮮膜,将其纏繞好,以起到保濕作用。

5)将托盤放在4°C冷室3-5天黑暗處理(5天為佳)

6)将其移到拟南芥專用培養箱(保鮮膜依然覆蓋)

7)在3-4天長日照下植物會萌發。大約5-7天将保鮮膜半開,直至兩對子葉全部長出。

8)将保鮮膜移除,一星期澆兩次去離子水(例如周二和周五)

注意

1)拟南芥對所有逆境都很敏感,所以請隻在托盤裡沒有水時澆水。

2)當植物要進入開花期,每兩星期澆一次加入1/4濃度霍格蘭溶液的水,兩次足夠。霍格蘭是富氮培養基,促進生殖生長。

3)盆栽土具有植物生長養分(慢速釋放肥),可以支持植物生長至3個月。所以請不要過量施肥。

4)注意植物開始開花的階段。此時盡量控制害蟲。

5)蚜蟲是一個普遍問題。噴灑1:100乙酰甲胺磷在染病植株上,重複噴灑三天。注意不要過量噴灑,否則會殺死植物。

6)當植物停止開花,将它們移到通風的環境使種子幹燥。當角果變黃或棕色時盡可能快收種,盡量少施壓力。

7)注意:首先,伱要清除别的物種的種子,用手指摩擦角果,使種子落到下面的紙上。将種子置于EP管中儲藏,在蓋子上穿一個洞。種子需在室溫下放置大于一星期以幹燥。然後将其置于有幹燥劑的密閉容器中。